SYBR Green Master Mix

快速荧光定量PCR试剂盒（SYBR Green） 

别名：SYBR Green荧光定量PCR预混液

产品简介：

本产品是使用SYBR® Green I嵌合荧光法进行qPCR反应的专用预混液。核心组分为一种新型的抗体法热启动DNA聚合酶,具有特异性强、检测灵敏度高等诸多优点,配以针对qPCR优化的最适Buffer,非常适合于进行高特异性、高灵敏度的qPCR反应。本产品是一种含有qPCR反应最适浓度SYBR® Green I的2×预混液,可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线,对靶基因定量准确、重复性好、可信度高。同时,优化的预混液可缩短Real-Time PCR的反应时间,适用于标准或快速PCR仪。 

保存条件：

收到本产品后, 请立即置于-20 ℃ 避光保存,一年有效。从-20 ℃ 取出使用时, 将冻存的qPCR MasterMix和ROX Reference Dye融解,然后轻轻颠倒混匀,待溶液完全均一后再行使用。如解冻后没有使用,须彻底混匀后重新冷冻。(在解冻过程中盐会出现分层现象,如未混匀进行冷冻,盐晶体的析出将会对酶造成损害)。如需一段时间内经常取用,可在2～8℃条件下储存3个月。避免反复多次冻融。

使用说明：

一、配制 Real-Time PCR反应体系：

1.、将所有试剂qPCR MasterMix,ROX Reference Dye,模板,引物和RNase-Free ddH2O,在室温下溶解并彻底混匀。

2、建议置于冰上进行Real-Time PCR反应液的配制。

3、盖上反应管,轻柔混匀。可瞬时离心,确保所有样品均在管底。

二、进行Real-Time PCR反应

建议采用两步法PCR反应程序进行反应。

若模板量较低等因素导致扩增效果不佳,可使用三步法程序进行PCR反应。

几种常见仪器的最适ROX Reference Dye浓度见下表：

常见问题:见说明书

注意事项：

1、本产品中含有荧光染料SYBR Green I,保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。

2、如果试剂没有混匀,其反应性能会有所下降。使用时请上下颠倒轻轻混匀,请不要使用振荡器进行混匀,尽量避免出现泡沫,并经瞬时离心后使用。

3、引物纯度对反应特异性影响很大,建议使用PAGE级别以上纯化的引物。

4、引物终浓度为0.3 μM可以在大多数体系中获得良好的扩增结果。如果需要进一步优化,可以在 0.2-0.5 μM范围内调整引物浓度。

5、20 μl反应体系中,cDNA模板的使用量一般小于100 ng,基因组DNA模板量一般小于50 ng,逆转录产物作为模板时,使用量应不超过PCR体系终体积的20%。

        6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。