Reactive Oxygen Species Assay Kit

活性氧检测试剂盒

产品简介：

活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针H₂DCFDA进行活性氧检测的试剂盒。H₂DCFDA本身没有荧光，可以自由穿过细胞膜，进入细胞内后，可以被细胞内的酯酶水解生成DCFH，而DCFH不能通透细胞膜，从而使探针很容易被装载到细胞内。细胞内的活性氧可以氧化无荧光的DCFH生成有荧光的DCF。检测DCF的荧光就可以知道细胞内活性氧的水平。根据活细胞中荧光的产生，可以判断细胞活性氧的含量和变化。用流式细胞仪或荧光显微镜可直接观察，是一种经典的活细胞中活性氧检测方法。

本试剂盒提供了活性氧阳性对照试剂Rosup，以便于活性氧的检测。Rosup是一种活性氧阳性诱导药物，浓度为50mg/mL，根据其荧光信号强度，可分析活性氧的实际水平。

本试剂盒本底低，灵敏度高，线性范围宽，使用方便。

产品组成：

图例：使用活性氧检测试剂盒来显示CHO细胞内活性氧荧光。左图为CHO细胞用试剂盒配备的活性氧阳性对照处理；右图为正常CHO细胞。绿色荧光表明细胞活性氧急剧增加，并能显示其定位。

注意事项：

1、  探针装载后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。

2、  阳性对照Rosup 一般使用浓度为100μM（推荐浓度100-400μM，具体依细胞类型而定）。通常刺激后0.5-4h可观察到显著的活性氧水平升高。对于不同的细胞，活性氧阳性对照的效果可能有较大的差别。如果在刺激后30 min内观察不到活性氧的升高，可延长诱导时间或适当提高活性氧阳性对照的浓度。如果活性氧升高得过快，可缩短诱导时间或适当降低活性氧阳性对照的浓度。

3、  对于某些特别的细胞，实验过程中如果发现没有刺激的阴性对照细胞荧光也比较强， 可以按照1:2000-1:5000稀释DCFH-DA，使DCFH-DA的终浓度为2-5μM，浓度过高容易出现非特异性染色。探针装载的时间也可以根据情况在15-60 min内适当进行调整。

4、  活性氧阳性对照（Rosup）仅仅用于作为阳性对照的样品，其他正常实验样品无需加入。

5、  探针装载完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的装载情况是否良好。DCF的激发光谱和发射光谱请参考上图。

6、  尽量缩短探针装载后到测定所用的时间（刺激时间除外），因为探针容易氧化，导致本底荧光值升高，所以建议工作液现用现配，以减少各种可能的误差。

7、  如果定量的话需要制作标准曲线。先做一个不同浓度H₂O₂氧化DCFA荧光值，做一条标准曲线，X轴为H₂O₂浓度，y轴是荧光值，得出一个方程，再看样品的荧光值即Y值是多少，对应的X值即对应的H₂O₂浓度。

8、  实验组荧光值不高可能是因为有的细胞在装载探针后细胞容易漂起来，洗细胞时实验组会吸走一部分细胞。所以在种细胞时可以把细胞量增加一倍，这样细胞紧密连接，贴壁比较牢，实验组的荧光值就高了。

9、  为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

-20℃避光保存，有效期一年。