产品简介:
Hoechst染料是一类在显微观察中标记DNA的荧光染料。因为这类荧光染料能标记DNA,所以它们也经常用于细胞核和线粒体的显像观察。这类染料中有两个相关的染料Hoechst 33258和Hoechst 33342经常使用。这两种染料都在紫外光下350nm处被激发,都在461nm处最大发射光附近发射蓝/青色荧光。Hoechst染料可以用于活细胞或者固定化细胞,并且经常用来代替其它核酸染料如DAPI。这两种染料关键的不同点在于,Hoechst 33342加有乙基,这使它具有更强的亲脂性,因此能更好的透过完整的细胞膜。而且有些种类的细胞由于可以更有效地将进入细胞的Hoechst染料主动转运到细胞外,因此在一些实验中,Hoechst 33258的渗透性明显比Hoechst 33342要弱些。这些染料也可以用来检测样品中的DNA含量,通过绘制发射光强度与DNA含量的标准曲线。
Hoechst 33342是一种可透过细胞膜并对DNA染色的细胞核染色试剂,它在嵌入双链DNA后释放强烈的蓝色荧光。Hoechst 33342常用于细胞凋亡检测,染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。Hoechst 33342-DNA的激发和发射波长分别为350 nm和460 nm。
使用方法(适用于大多数细胞):
一.对于固定的细胞或组织:
1.对于细胞或组织样品,固定后,适当洗涤去除固定剂。随后如果需要进行免疫荧光染色,则先进行免疫荧光染色,染色完毕后再按后续步骤进行Hoechst 33342染色。如果不需要进行其它染色,则直接进行后续的Hoechst 33342染色。
2.对于贴壁细胞或组织切片,可以在盖玻片上或细胞培养板中原位染色,加入少量Hoechst 33342染色液,覆盖住样品即可。对于悬浮细胞,至少加入待染色样品体积3倍的染色液,并混匀。室温放置3-5分钟。
3.吸除Hoechst 33342染色液,用TBST 、PBS或生理盐水洗涤2-3次,每次3-5分钟。
4.直接在荧光显微镜下或封片后荧光显微镜下观察。观察细胞凋亡时,会看到凋亡细胞的细胞核呈致密浓染,或呈碎块状致密浓染。
二.对于活细胞或组织:
1.加入适当量Hoechst 33342染色液,必须充分覆盖待染色的样品,通常对于6孔板,一个孔需加入1ml 染色液,对于96 孔板每一个孔需加入100ul染色液。
2.在适宜于细胞培养的温度培养20-30分钟。弃染色液,用PBS或培养液洗涤2-3次即可进行荧光检测。
注意事项:
1、 荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽量当天完成检测。为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片液。
2、 Hoechst 33342对人体有一定刺激性,为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存条件:
-20℃避光保存,有效期2年。
货号 | BL804A |
规格 | 10ml |
品牌 | biosharp |
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