总RNA提取试剂

总RNA提取试剂

¥250.00

货号:BS258A

规格:100ml

品牌:biosharp

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Total RNA Isolation Reagent

 RNA 提取试剂   

产品简介:

本产品在经典配方的基础上进行升级,适用于细胞或组织总RNA抽提的试剂。TRI Reagent 能很好提取动物细胞或组织及细菌的总RNA,但对植物组织RNA的提取有选择性。模式植物(拟南芥,小麦,烟草,玉米,大豆)能提取较好的RNA。一些多糖多酚含量高的植物(西红柿,银杏,梧桐,毛白杨,棉花等)叶片使用TRI Reagent不能提取 RNA

TRI Reagent 可以抽提长达15 kbRNA,也可以抽提microRNA等小RNA,抽提小 RNA时宜-70℃沉淀过夜。

TRI Reagent抽提所得RNA DNA和蛋白污染。每一百万细胞约可得5-15µg RNA;每毫克组织约可得1-10µg RNA,产量因细胞和组织不同而异。

TRI Reagent抽提所得RNA可直接用于Northern,点杂交,纯化mRNA,体外翻译,RNase protein assaycDNA克隆以及RT-PCR,也可用于基因表达芯片分析,高通量测序等对RNA质量较高的情况。

使用方法:

1、细胞裂解或组织匀浆。

1)贴壁细胞:吸尽培养液,每 10cm2细胞加入1ml TRI Reagent。一般6孔板每孔加 1ml12孔板每孔加0.5ml,晃动 3-5 下,再用枪吹打 2-3下,确保全部裂解,然后吸至离心管中。

2)悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,每五百万至一千万动植物或酵母细胞或一千万细菌,加入1ml TRI Reagent。用枪吹打或适当涡旋,确保全部裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分,可用匀浆器匀浆,确保全部裂解。

3)组织

1)  植物组织:植物叶片直接放入研钵中,加入少量液氮,迅速研磨成粉末,每50-100mg 植物叶片加入1ml TRI Reagent

注:经典模式植物如拟南芥、烟草、小麦、玉米等植物叶片能很好地提取 RNA;但一些多糖多酚植物,如西红柿、棉花、毛白杨等,不能使用 TRI Reagent 提取 RNA

2)  动物组织:按 10-30mg 组织加入 1ml TRI Reagent,用电动匀浆器或者一次性研磨杵充分匀浆。

2、对于某些蛋白,多糖或脂含量很高的细胞或组织,TRI Reagent裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物。需12,000g4℃离心10分钟,然后吸取澄清的裂解产物至一新的离心管中。

3、室温放置5分钟,使样品充分裂解。

4、每毫升TRI Reagent0.2ml氯仿(或氯仿替代物BL1665A),涡旋混匀或猛烈晃动15秒,室温放置2-3分钟。

512,000g4℃离心15分钟,然后吸取含总 RNA 的上层无色水相至一新的离心管中, 每毫升TRI Reagent约可吸取0.5-0.55ml

6、加入与上清等体积的冰冷异丙醇,颠倒数次混匀,室温沉淀10分钟。如果希望提取 microRNA等小RNA,推荐-70℃沉淀过夜。

712,000g4℃离心10分钟,在管底可见RNA沉淀,弃上清。

8、每毫升最初的TRI Reagent加入1ml 75%乙醇(DEPC 水配制),涡旋或颠倒混匀,

97,500g 4℃离心5分钟,弃上清。再用离心机甩一下(>5,000rpm, 离心1秒),小心吸尽液体。

10、待 RNA 晾干后,加入20-50 μl DEPC水溶解,-70℃冻存。注意:切勿让RNA过分干燥,否则将极难溶解,且测出的A260/280值会低于1.6

注意事项:

1、需自备氯仿或氯仿替代物BL1665A,异丙醇,DEPC水,75%乙醇(DEPC水配制)。

2、所有离心管,枪头及相关溶液都必须无RNA酶污染。耐高温器物可150℃烘烤4小时以去除RNA酶,其它器物去除RNA酶可考虑用0.01%DEPC水浸泡过夜,然后灭菌,烘干。溶液需用DEPC水配制。

3、使用冻存的细胞或组织抽提总RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽提RNA,推荐先加入适量TRI Reagent,并裂解样品后冻存。

4、必须戴一次性手套操作,且尽量不要对着RNA样品说话,以防RNA酶污染。

5TRI Reagent含有毒物质苯酚,避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛,请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触TRI Reagent,请立即用大量去垢剂和水冲洗,如仍有不适,请听取医生意见。

6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存方法:

4℃保存,一年有效。


货号 BS258A
规格 100ml
品牌 biosharp
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