Total RNA Isolation Reagent

总 RNA 提取试剂   

产品简介：

本产品在经典配方的基础上进行升级，适用于细胞或组织总RNA抽提的试剂。TRI Reagent 能很好提取动物细胞或组织及细菌的总RNA，但对植物组织RNA的提取有选择性。模式植物（拟南芥，小麦，烟草，玉米，大豆）能提取较好的RNA。一些多糖多酚含量高的植物（西红柿，银杏，梧桐，毛白杨，棉花等）叶片使用TRI Reagent不能提取 RNA。

TRI Reagent 可以抽提长达15 kb的RNA，也可以抽提microRNA等小RNA，抽提小 RNA时宜-70℃沉淀过夜。

TRI Reagent抽提所得RNA无 DNA和蛋白污染。每一百万细胞约可得5-15µg RNA；每毫克组织约可得1-10µg RNA，产量因细胞和组织不同而异。

TRI Reagent抽提所得RNA可直接用于Northern，点杂交，纯化mRNA，体外翻译，RNase protein assay，cDNA克隆以及RT-PCR，也可用于基因表达芯片分析，高通量测序等对RNA质量较高的情况。

使用方法：

1、细胞裂解或组织匀浆。

（1）贴壁细胞：吸尽培养液，每 10cm²细胞加入1ml TRI Reagent。一般6孔板每孔加 1ml，12孔板每孔加0.5ml，晃动 3-5 下，再用枪吹打 2-3下，确保全部裂解，然后吸至离心管中。

（2）悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，每五百万至一千万动植物或酵母细胞或一千万细菌，加入1ml TRI Reagent。用枪吹打或适当涡旋，确保全部裂解。某些酵母和细菌如裂解不充分，可用匀浆器匀浆，确保全部裂解。

（3）组织

1)  植物组织：植物叶片直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨成粉末，每50-100mg 植物叶片加入1ml TRI Reagent。

注：经典模式植物如拟南芥、烟草、小麦、玉米等植物叶片能很好地提取 RNA；但一些多糖多酚植物，如西红柿、棉花、毛白杨等，不能使用 TRI Reagent 提取 RNA。

2)  动物组织：按 10-30mg 组织加入 1ml TRI Reagent，用电动匀浆器或者一次性研磨杵充分匀浆。

2、对于某些蛋白，多糖或脂含量很高的细胞或组织，TRI Reagent裂解后可能会有不溶物或油脂状漂浮物。需12,000g，4℃离心10分钟，然后吸取澄清的裂解产物至一新的离心管中。

3、室温放置5分钟，使样品充分裂解。

4、每毫升TRI Reagent加0.2ml氯仿（或氯仿替代物BL1665A），涡旋混匀或猛烈晃动15秒，室温放置2-3分钟。

5、12,000g，4℃离心15分钟，然后吸取含总 RNA 的上层无色水相至一新的离心管中， 每毫升TRI Reagent约可吸取0.5-0.55ml。

6、加入与上清等体积的冰冷异丙醇，颠倒数次混匀，室温沉淀10分钟。如果希望提取 microRNA等小RNA，推荐-70℃沉淀过夜。

7、12,000g，4℃离心10分钟，在管底可见RNA沉淀，弃上清。

8、每毫升最初的TRI Reagent加入1ml 75%乙醇（DEPC 水配制），涡旋或颠倒混匀，

9、7,500g 4℃离心5分钟，弃上清。再用离心机甩一下（>5,000rpm, 离心1秒），小心吸尽液体。

10、待 RNA 晾干后，加入20-50 μl DEPC水溶解，-70℃冻存。注意：切勿让RNA过分干燥，否则将极难溶解，且测出的A260/280值会低于1.6。

注意事项：

1、需自备氯仿（或氯仿替代物BL1665A），异丙醇，DEPC水，75%乙醇（DEPC水配制）。

2、所有离心管，枪头及相关溶液都必须无RNA酶污染。耐高温器物可150℃烘烤4小时以去除RNA酶，其它器物去除RNA酶可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后灭菌，烘干。溶液需用DEPC水配制。

3、使用冻存的细胞或组织抽提总RNA的效果通常比新鲜的细胞或组织差一些。因为在细胞或组织冻融过程中一些细胞或组织内的RNase会被释放出来并剪切样品。如果不能及时抽提RNA，推荐先加入适量TRI Reagent，并裂解样品后冻存。

4、必须戴一次性手套操作，且尽量不要对着RNA样品说话，以防RNA酶污染。

5、TRI Reagent含有毒物质苯酚，避免接触皮肤或吸入。为防止溅入眼睛，请戴防护眼镜或使用透明保护屏。如皮肤接触TRI Reagent，请立即用大量去垢剂和水冲洗，如仍有不适，请听取医生意见。

6、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存方法：

4℃保存，一年有效。