Click-iT EdU-488细胞增殖检测试剂盒(适用于FACS、FM)

产品简介：

细胞增殖能力的检测是评估细胞活性、基因毒性和抗肿瘤药物效果等的基本方法。目前检测细胞增殖的方法有很多。其中，公认最精确的检测细胞增殖的方法是直接检测细胞中DNA的合成。由于该方法有放射性污染且很难实现单细胞检测，随后逐渐被基于抗体检测的BrdU(bromo-deoxyuridine)法所替代。BrdU法的缺点是需要变性DNA后才能与抗体结合，导致DNA双链结构被破坏，影响其他染料的结合，染色弥散，准确性降低等问题。不论是最初使用的放射性标记核苷掺入法，还是后续改进的基于抗体检测的BrdU法，都有着一定的自身局限性。

EdU（5-Ethynyl-2'- deoxyuridine，5-乙炔基-2'-脱氧尿嘧啶核苷）是一种含有一个乙炔基团的胸腺嘧啶脱氧核苷类似物，当将其注射到动物体内或者对体外培养的细胞进行孵育，这些小分子能够迅速扩散到各个器官组织，并渗入到细胞中，可以在细胞增殖时期代替胸苷（T）掺入到新合成的DNA中。EdU分子中的乙炔基团能与荧光标记的叠氮化合物探针(如Alexa Fluor 488、Alexa Fluor 555、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 647等)在铜离子催化下发生点击反应(Click reaction)形成稳定的三唑环，因此可以使新合成的DNA被相应的荧光探针所标记。与另外两种方法相比，没有放射性污染，无需使用抗体、操作便捷、检测灵敏度高。

本试剂盒可用于检测体外培养的细胞或动物组织中细胞增殖情况。试剂盒中荧光探针为绿色荧光，最大激发波长为491 nm，最大发射波长为516 nm，处于增殖的细胞被标记后，细胞核会显示出明亮的绿色荧光，通过配套常规细胞核染料共同标记细胞核（本试剂盒提供 Hoechst 33342细胞核染料），可用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜等仪器直接观察细胞增殖情况；也可以使用流式细胞仪检测体外培养细胞群荧光强度，根据荧光强度，来判断细胞周期中S期的DNA复制活性。

产品组成:

使用方法：

见说明书

注意事项：

1、 对于常见的哺乳动物细胞如HeLa、3T3、HEK293等，细胞周期大约在18-25小时，孵育时间宜在2小时左右。人胚胎细胞的细胞周期约30分钟，推荐的孵育时间为5分钟；酵母细胞的细胞周期约3小时，推荐的孵育时间为20分钟，增殖的神经细胞其细胞周期约5天，推荐的孵育时间为1天。孵育时间小于45分钟时，建议提高EdU的浓度；孵育时间大于20小时时，建议适当降低EdU的浓度。

2、 对于体外培养细胞，具体EdU使用浓度、孵育时间随样品以及研究目的的不同，可进行适当调整。

3、 部分组织细胞增殖速度缓慢，为了排除造模效果不佳等因素，建议选增殖快的组织样品作为参照样本（如肠道组织）。

4、 背景颜色过深，可能是实验中洗涤不充分、组织样品固定时间过长、固定液残余导致。

5、 EdU催化添加试剂（试剂C）易氧化，尽量避免长时间暴露于空气中，配制成水溶液后，建议分装保存；经测试，如EdU催化添加试剂颜色发生轻微变化，点击反应催化体系依旧能够正常进行，如呈现 棕色，表明该组分已失效，请弃用。

6、 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

7、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

-20℃避光保存一年。