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产品简介：

自噬(autophagy)是细胞受到刺激后吞噬自身的细胞质或细胞器，最终将吞噬物在溶酶体内降解的过程，自噬体(autophagosome)为双层膜包被的圆形或椭圆形结构，内含细胞质、长寿蛋白质和异常蛋白聚集物、损伤或多余细胞器如线粒体、粗面内质网和微体、病毒和细菌等。自噬是一种进化上保守的降解过程，通过溶酶体途径将长寿命蛋白、细胞器及其他细胞质等组分进行降解，自噬通路的激活对多种细胞功能都是必需的，包括饥饿状态下的存活、细胞内组分清除、发育及免疫等过程。

细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)，即Autophagy Staining Assay Kit with MDC，是一种使用丹酰尸胺，也称单丹磺酰尸胺或丹酰戊二胺(monodansylcadaverine, MDC)作为荧光探针快速便捷地检测细胞自噬的试剂盒。丹酰尸胺(Dansylcadaverine, MDC)是一种嗜酸性的荧光色素，是细胞自噬检测最常用的荧光探针之一,通常被用于检测自噬体形成的特异性标记染色剂，其检测激发滤光片波长355~380nmnm，阻断滤光片波长512~530nm。细胞自噬染色检测试剂盒(MDC法)适用于培养细胞的荧光自噬染色观察，又可用FACS检测细胞自噬发生的比例，又称为MDC染色液，可与EB合用双染。

产品组分:

使用方法：（仅供参考）

(一)玻片法

1. 收集细胞，用300～500μl的Wash Buffer清洗细胞1次，800～1000g离心5min，弃上清，加入适量的Stain Buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至10⁶/ml。

2. 取90μl细胞悬液至新的1.5ml离心管中，加入10μl的MDC Stain(10×)，轻轻混匀。

3. 37℃或室温避光染色15～60min。

4. 800～1000g离心5min，弃上清，收集细胞，用300～500μl的Wash Buffer清洗细胞2次，800～1000g离心5min，弃上清。

5. 加入100μl的Wash Buffer重悬细胞，滴加于载玻片上并加盖玻片。

6. 荧光显微镜观察计数并拍照，也可用流式细胞仪检测药物干预组MDC阳性细胞百分比。

(二)96孔板法

1. 轻轻吸除96孔板中的培养液，各孔加入10μl MDC Stain(10×)和90μl的Stain Buffer，37℃ 5%CO2条件下避光孵育15～60min。

2. 各孔加入100μl Wash Buffer清洗2～3次，荧光显微镜或流式细胞仪检测观察。

(三) MDC与EB双染法

1. 收集细胞，用300～500μl的Wash Buffer清洗细胞1次，800～1000g离心5min，弃上清，加入适量的Stain Buffer重悬细胞，计数并调节细胞浓度至10⁶/ml。

2. 取90μl细胞悬液至新的1.5ml离心管中，加入10μl MDC Stain(10×)和0.2uM EB染色液，轻轻混匀，滴加于载玻片上，室温避光染色15～60min，加盖玻片。

3. 荧光显微镜或流式细胞仪检测观察。

染色结果：

荧光染色结果：药物干预组细胞呈现了更高的荧光强度和更多的亮绿色MDC标记颗粒；

FACS检测结果：药物干预组MDC阳性细胞百分比高于对照组。

注意事项：

1. MDC Stain和EB对人体有一定害处，请小心操作。

2. 收集细胞前可在培养液中加入不同浓度的药物培养一定时间，诱导细胞自噬。

3. 操作过程中应注意减少试剂暴露于强光下的时间。

4. Wash Buffer可用PBS代替。

5. 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

6. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

MDC Stain(10×)需-20℃避光保存，其他成分保存于4℃，12个月有效。