产品简介：

Protein A和Protein A/G免疫沉淀磁珠及免疫沉淀试剂盒系列产品是利用纳米表面技术使其高密度定向包被到超顺磁性微球表面，该产品具有更多的抗体结合位点，磁珠使用量更少，非特异性结合率低，可便捷高效地进行免疫沉淀实验。每毫升免疫沉淀磁珠结合 Human IgG 的能力可达到 300 μg 以上，单个沉淀反应仅需 25 μL 磁珠即可完成检测。微米级磁珠提供的超大比表面积，大幅缩短抗体与抗原吸附所需的平衡时间，15 min 内即可完成抗体吸附过程，30 min 内完成抗原沉淀操作。简短的操作时间避免长时间操作造成目标蛋白水解，保证了目标蛋白的活性及蛋白复合物的完整性。

本试剂盒内磁珠粒径为2μm，结合Human IgG 能力（Antibody Capacity）为0.4~0.5 mg/mL，广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀反应。

使用方法（仅供参考）：详见说明书。

注意事项：

1、本产品须与磁性分离器配套使用。

2、磁珠使用前应充分振荡均匀；请勿将磁珠冷冻或离心，以免引起不可逆聚集。

3、磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。

4、10×PBS应在无菌条件下稀释，一旦发现溶液有污染情况，请停止使用该溶液。

5、为保证最佳的实验结果，请选择特异性较强的抗体进行免疫沉淀反应。

6、操作者可根据实际需求，利用抗体结合反应步骤以及抗原结合反应步骤中收集的上清液检测抗体、抗原和磁珠的结合情况。

7、对于 IP 实验，不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的，抗体与抗原结合还会受到结合缓冲液和洗涤缓冲液的影响，因此，如果操作者使用本试剂盒提供的缓冲体系不能获得很好的实验结果，可自行筛选及配制缓冲液进行实验。

8、本磁珠表面包被的重组蛋白 Protein A在极端条件下（如低 pH、加热处理）存在极低的蛋白脱落情况，但仍然不建议操作者用于分子量约 130 kD 目标蛋白的免疫沉淀实验。实验前可参考附表1的数据了解不同种属来源及亚型的抗体与Protein A 磁珠、Protein A/G的结合能力。

9、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

10、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

常见问题及解答：

Q1：如何提高抗体与磁珠结合效率?

A1：磁珠与抗体的结合效率与抗体的种属来源及所属亚型有关，请确认抗体的类型与 Protein A配基的亲和效率（附表1）。如抗体所属亚型与 Protein A的亲和度较低，可以通过增加抗体与磁珠的孵育时间（30～120 min）、提高结合缓冲液的 pH 值（8～9）及降低离子强度（25～100 mM NaCl）等方法提高亲和效率。

Q2：如何提高磁珠在免疫沉淀反应中的特异性?

A2：可以先将抗体与样品进行孵育，形成抗体-抗原复合物，再用 Protein A磁珠捕获复合物。这种方法可以提高抗体与抗原的结合效率，并降低磁珠与样品接触的时间，从而提高沉淀产物的特异性。对于蛋白质/核酸共沉淀或染色质免疫共沉淀也推荐使用此法。

Q3：如何避免磁珠在储存或使用过程中可能出现的聚集情况？

A3：磁珠应保存在 2～8℃，使用时应避免由于污染而导致的不可逆聚集，或因干燥而导致的聚集。磁珠在低pH 的洗脱缓冲液中发生聚集属于正常现象，不影响磁珠的正常使用。在结合缓冲液和洗脱缓冲液中添加终浓度为 0.1%（v/v）的非离子型去垢剂（如 NP-40、Tween-20 或 Triton X-100）可有效防止磁珠聚集。经过低pH 洗脱操作的磁珠可以用结合缓冲液洗涤至中性，然后用含有 0.1% （v/v）Tween-20 的 Tris buffer（pH7.5）振荡重悬磁珠，并用超声波水浴处理 2 min，即可使磁珠恢复均匀状态，以上处理均不影响磁珠的抗体结合效率。

Q4：如何解决磁珠易粘附管壁的现象？

A4：建议使用低吸附率的耗材进行磁珠操作。另外，在缓冲液中添加 0.01%～0.1%（v/v）的非离子型去垢剂（如 NP-40、Tween-20 或 Triton X-100)可以有效降低磁珠对耗材的粘附。

Q5：磁珠在使用过程中出现结块现象？

A5：磁珠在使用时如果出现结块现象一般较难振荡打散，容易导致分布不均，出现该问题的原因是磁珠在磁场中放置太久而使磁珠牢固的结合在一起。用超声波水浴处理 2 min 即可打散磁珠使其重新分散，但应注意超声处理也会使磁珠在样品溶液中捕获的抗体脱落，所以磁珠在加样后洗脱前不宜使用该方法。

保存条件：

4℃保存，两年有效。