商品详情:
产品简介:
RIPA 裂解液是一种经典的细胞组织快速裂解液,对动物细胞膜、胞浆、胞核成分均有较强的裂解作用,裂解得到的蛋白样品可以用于常规的 Western、IP 等。RIPA 的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA 裂解液的配方有很多种,根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。
RIPA裂解液(强中弱套装)含有 RIPA 裂解液(强)、RIPA 裂解液(中)和RIPA 裂解液(弱)各100ml,便于实验时探索不同的实验条件。
用 RIPA 裂解液(强中弱套装)裂解得到的蛋白样品,可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
产品组分:
产品编号 | 产品名称 | 规格 |
BL1320A-1 | RIPA裂解液(强) | 100 ml |
BL1320A-2 | RIPA裂解液(中) | 100 ml |
BL1320A-3 | RIPA裂解液(弱) | 100 ml |
使用方法(仅供参考):
对于培养细胞样品:
1、使裂解液充分融解,混匀,取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的最终浓度为 1mM。
2、根据样品的类型进行如下操作:
对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(若血清中的蛋白没有干扰,可不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250μl裂解液的比例加入裂解液。用移液器吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒后,细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞:离心收集细胞,去除培养基,用手指把细胞用力弹散,按照 6 孔板每孔细胞加入150-250μl裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应无明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管后再裂解。
3、充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。
裂解液用量说明:通常 6 孔板每孔细胞加入 150 μl裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高,可以适当加大裂解液的用量到 200 μl或 250 μl。
对于组织样品:
1、把组织剪切成细小的碎片。
2、融解 RIPA 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF,使 PMSF 的最终浓度为 1mM。
3、按照每 20 毫克组织加入 150-250 μl裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分,可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4、用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5、充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。
6、如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器裂解得充分。
注意:RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下,可以直接离心取上清用于后续实验;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物,随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子,例如 NF-kappaB、p53 等时,通常不必进行超声处理,就可以检测到这些转录因子。
注意事项:
1、为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。
2、需自备 PMSF。
3、裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。
4、关于裂解液,也需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。
5、本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。
6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存条件:
-20℃保存,一年有效。
货号 | BL1320A |
规格 | 3×100ml |
品牌 | Biosharp |