商品详情：

产品简介：

RIPA裂解液是一种传统的细胞组织快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是 Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。

RIPA 裂解液（强，无抑制剂）的主要成分为50 mM Tris (pH 7.4)，150 mM NaCl，1% Triton X-100，1% sodium deoxycholate，0.1% SDS，不含蛋白酶抑制剂，不含磷酸酶抑制剂，不含螯合剂（如EDTA或EGTA），可用于明胶酶谱实验的蛋白提取。使用前可根据实验需要添加特定抑制剂以及EDTA或EGTA。

用 RIPA 裂解液（强，无抑制剂）裂解得到的蛋白样品，可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂，不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

使用方法（仅供参考）：

对于培养细胞样品：

1、使裂解液充分融解，混匀，取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使PMSF 的最终浓度为 1mM。

2、根据样品的类型进行如下操作：

对于贴壁细胞：去除培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍（若血清中的蛋白没有干扰，可不洗）。按照 6 孔板每孔加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。用移液器吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒后，细胞就会被裂解。

对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散，按照 6 孔板每孔细胞加入150-250ul 裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应无明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成 50-100万细胞/管后再裂解。

3、充分裂解后，16000 g 离心 5 分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

裂解液用量说明：通常 6 孔板每孔细胞加入 150 µl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高，可以适当加大裂解液的用量到 200 µl或 250 µl。

对于组织样品：

1、把组织剪切成细小的碎片。

2、融解 RIPA 裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入 PMSF，使 PMSF 的最终浓度为 1mM。

3、按照每 20 mg组织加入 150-250 µl裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分，可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）

4、用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5、充分裂解后，16000 g 4℃ 离心5分钟，取上清，即可进行后续的 PAGE、Western 和免疫沉淀等操作。

6、如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈 vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器裂解得充分。

注意：RIPA 裂解液的裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组 DNA 等的复合物。在不检测和基因组 DNA 结合特别紧密的蛋白的情况下，可以直接离心取上清用于后续实验；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理打碎打散该透明胶状物，随后离心取上清用于后续实验。如果检测一些常见的转录因子，例如 NF-kappaB、p53 等时，通常不必进行超声处理，就可以检测到这些转录因子。

注意事项：

1、为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2、需自备 PMSF。

3、裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。

4、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

-20℃保存，一年有效。