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产品简介：

Western及IP细胞裂解液（无抑制剂）是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞，可以用于 PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)和免疫共沉淀(Co-IP)。

Western及IP细胞裂解液（无抑制剂）的主要成分为 20 mM Tris (pH7.5)，150 mM NaCl，1% Triton X-100等，裂解后能维持原有的蛋白间相互作用。使用本裂解液时，可以根据具体用途自行添加或者不添加特定抑制剂。

用本细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的 Triton X-100 等干扰物质，不能用 Bradford 法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

使用方法（仅供参考）：

1、溶解裂解液，混匀；取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入1/100体积的100 mM PMSF，使PMSF的最终浓度为1 mM。如进行蛋白磷酸化研究，需要加入磷酸酶抑制剂。

2、根据样品的类型进行如下操作：

贴壁细胞：去除培养液，加入适量1×PBS，轻轻漂洗一遍，不要扰动贴壁细胞。按照6孔板每孔加入100-200 μl裂解液的比例加入裂解液，用移液器吹打数下，使裂解液和细胞充分接触，冰上裂解细胞5分钟，用细胞刮刀刮下细胞，收集于1.5 ml离心管中，冰上继续裂解15分钟，间歇混匀。

悬浮细胞：450g 4℃ 离心5 min收集细胞；用适量1×PBS重悬细胞，450g 4℃ 离心5 min，收集细胞；重复漂洗细胞一次；按照细胞沉淀体积（PCV）20 μl加入200 μl 裂解液，混匀细胞沉淀，冰浴处理15分钟，间歇混匀。

组织样品：把组织剪切成细小的碎片。按照每 20 mg组织加入 2000 µl裂解液的比例加入裂解液。（如果裂解不充分，可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。）

3、用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。裂解物冰浴处理15分钟。

注意：裂解混合物不建议使用超声波破碎仪处理，因为超声波处理比较剧烈，容易破坏蛋白的相互作用，导致蛋白变性。

4、充分裂解后，4℃ 16000 g离心10分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。

注意事项：

1、为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2、需自备PMSF或其他蛋白酶抑制剂；如进行蛋白磷酸化研究，还需要自备磷酸酶抑制剂。

3、裂解样品的所有步骤都需在冰上或 4℃进行。

4、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。

5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

-20℃保存，一年有效。