产品简介：

蛋白预制胶Blue Native PAGE是一种从生物样品（质膜，胞浆等）中分离蛋白质复合物的电泳技术。能分离10kDa-10000kDa范围内的蛋白质以及蛋白质复合物。

蛋白预制胶Blue Native PAGE以考马斯亮蓝G-250代替SDS使蛋白质复合物带负电荷，根据各个不同复合物分子量不同从而在胶中得到分离。这些复合物在胶中以蓝色条带形式呈现。样品制备过程中用一些温和的去污剂如dodecylmaltoside(DM)，Triton X-100和毛地黄皂苷(digitonin)等溶解，从而使复合物以近似天然的状态分离。

实验中若想进一步分析复合物各个亚基的成分，通常采用Blue Native PAGE结合SDS-PAGE的方式。

产品特点：

安全便捷—无需配制，即开即用，去掉梳子即可上样

玻璃胶板—有效减少蛋白非特异性吸附，使蛋白条带更为尖锐，清晰

超宽分辨率—有效分离10kDa-10000kDa范围内的蛋白质以及蛋白质复合物

操作便捷—只需用刀片在玻璃胶板一侧轻轻划一下即可

兼容性广—适用Bio-Rad Mini-PROTEAN，Hoefer Mighty Small，六一，天能和君意东方等品牌mini电泳槽

基本信息：

使用方法（仅供参考）：

一、预制胶、电泳液的准备

1、将蛋白预制胶Blue Native PAGE从包装袋中取出，将预制胶固定在电泳槽中，平稳、缓慢地拔出梳子。

2、请按下表配制电泳缓冲液。

注意：阴极电泳缓冲液I和阴极电泳缓冲液II呈中性，无需调节pH值；阳极电泳缓冲液需用HCl调节pH至7.0。阴极电泳缓冲液I中的高浓度Coomassie Blue G-250可能会聚集，建议室温保存，并在使用前搅拌混匀。

3、内槽加满阴极电泳缓冲液I，外槽加入阳极电泳缓冲液没过电泳槽底部的阳极即可。

注意：建议用1毫升移液枪吸取阴极电泳缓冲液I轻轻吹打加样孔，将加样孔冲洗干净，去除气泡和残留的缓冲液，这样电泳的效果更佳。

二、电泳

1、将处理好的样品加在上样孔中。最佳上样量须通过实验来确定，样品过量较易导致条带拖尾和信号过强。

2、插好电源，以恒压100V开始电泳，待样品跑过浓缩胶后，电压改为250V，之后可以慢慢增大，并控制电流在50mA以内，直到溴酚蓝条带电泳至凝胶近底部或实验预定的位置。

3、待样品跑到凝胶的1/3处更换阴极电泳液，将阴极电泳缓冲液I更换为阴极电泳缓冲液II，这样可以降低胶的背景。

4、电泳结束后，剥胶，对凝胶进行固定、染色、转膜，该过程和普通的SDS-PAGE相同。如果无需分析复合物各个亚基的组分，可以直接切割感兴趣的目的条带，酶解后进行质谱鉴定。若需分析复合物各个亚基的组成，可进行二向SDS-PAGE。

三、二向SDS-PAGE操作过程

1、制胶：根据实验需求选择合适浓度的SDS-PAGE。

2、平衡：将凝胶根据条带的位置切成长条，置于含有1%SDS，1%巯基乙醇溶液中平衡2h，水洗20min。

3、转移：先煮琼脂糖（0.05g琼脂糖，10mL电泳缓冲液，30μL溴酚蓝），然后将平衡好的胶条摆在二向SDS胶的浓缩胶胶面上，用压胶片把胶条压紧，使二者紧密结合，并保证两个胶面之间没有气泡，再向胶面上封一层琼脂糖。

4、跑胶：等琼脂糖凝固后，将玻璃板摆到电泳槽上，倒入电泳缓冲液，以25mA恒流开始电泳。待样品跑过浓缩胶后，将电流改为45mA直到电泳结束。

5、