非变性PAGE凝胶制备试剂盒
商品详情：
产品简介：
本非变性PAGE凝胶制备试剂盒包含非变性凝胶制备所需的全部试剂。本试剂盒可配制30-50块常规大小（8×10 cm）的非变性PAGE胶。
由于采用非连续Laemmli凝胶系统（Tris-Glycine系统），电泳凝胶系统pH在8.3-8.8，因此要求待分离的蛋白等电点pI＜8.0（酸性蛋白），这样蛋白在凝胶系统内带负电荷，pI越低于8.0，带更多的负电荷，在凝胶电泳中才能正常向正极泳动。
产品组分：
产品编号 | 产品名称 | 规格 | 保存条件 |
BL1336A-1 | 30%PAA(29:1) | 100 ml | 4℃，避光 |
BL1336A-2 | 4×分离胶缓冲液 pH8.8 | 100 ml | RT |
BL1336A-3 | 4×浓缩胶缓冲液 pH6.8 | 50 ml | RT |
BL1336A-4 | 10%APS（干粉） | 0.5 g | RT，配制后-20℃ |
BL1336A-5 | TEMED | 0.5 ml | 4℃，避光 |
使用方法：
一、配制10% APS-5 ml
将0.5 g APS干粉溶于5 ml超纯水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20℃保存的10% APS。
二、配制分离胶
1、根据表一，将不同体积的成分在小烧杯中混合；先后加入TEMED和10%APS，轻轻搅拌混匀，避免产生气泡。
2、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液（对于mini-gel，凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可），然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-5 cm的水层，使凝胶表面保持平整。
3、静置15-20分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。
三、配制浓缩胶
1、去除覆盖在分离胶上的水层。
2、根据表一，将不同成分在一个小烧杯中混合；先后加入TEMED和10%APS，轻轻搅拌混匀，避免产生气泡。
3、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
4、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
5、静置30-60分钟，等待浓缩胶聚合。
表一 配制不同浓度1 mm厚度凝胶所需各组分的体积
组分 | 4%浓缩胶 | 分离胶 | ||||||||||||
6% | 8% | 10% | 12% | 15% | ||||||||||
超纯水 | 1.23 ml | 2.7 ml | 2.4 ml | 2 ml | 1.7 ml | 1.2 ml | ||||||||
30% PAA（29:1） | 0.27 ml | 1 ml | 1.3 ml | 1.7 ml | 2 ml | 2.5 ml | ||||||||
4×浓缩胶缓冲液 | 0.5 ml | - | - | - | - | - | ||||||||
4×分离胶缓冲液 | - | 1.25 ml | 1.25 ml | 1.25 ml | 1.25 ml |
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