商品详情:
产品简介:
本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取具有活性的全蛋白,用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer匀浆裂解组织或细胞,作用温和,提取过程简便高效。获得的全蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀和酶的活性的测定的等后续研究,但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究,因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂。
产品组分:
产品编号 | 产品名称 | 规格 | 保存条件 |
BL1590A-1 | Lysis Buffer | 50ml | 2-8℃ |
BL1590A-2 | 磷酸酶抑制剂 | 500μl | -20℃ |
BL1590A-3 | 蛋白酶抑制剂 | 50μl | -20℃ |
BL1590A-4 | PMSF(100mM) | 500μl | -20℃ |
使用方法(仅供参考):
一、组织蛋白的提取
1、在每1ml冷Lysis Buffer加入10μl磷酸酶抑制剂,1μl蛋白酶抑制剂和10μl PMSF,混匀。冰上保存数分钟待用。
2、每100mg固体组织置于培养皿中,手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块,加入0.5~1ml冷Lysis Buffer,玻璃匀浆器上下手动匀浆15次,注意低温操作;
3、取组织匀浆液转移到1.5ml预冷的离心管,离心10000转/分,4℃离心5min;
4、取上清转移至新的预冷的离心管中,即为全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
5、分装保存于-70℃,避免反复冻融。
二、培养细胞蛋白的提取
1、贴壁培养的细胞,吸去培养基后,加入10ml/150mm培养板的冷PBS洗两次,每次振摇数次以尽量去除培养液;
2、悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞,将细胞及培养液移至离心管中,1000转/分离心10min,再用10ml/150mm培养板的冷PBS,1000转/分离心5min,洗两次;
3、在每1ml冷Lysis Buffer加入10μl磷酸酶抑制剂,1μl蛋白酶抑制剂和10μl PMSF(用户自配:浓度100mM,溶于异丙醇),混匀。冰上保存数分钟待用。
4、在上述培养板或离心管的细胞中,加入上述配制好的冷Lysis Buffer,加入量如下表所示:
细胞数量 | Lysis Buffer加入量 |
107个 | 0.5ml~1ml |
5×106个 | 0.2ml~0.5ml |
5、冷室或冰上操作,贴壁细胞用细胞刮子刮下,皆Lysis Buffer一同转移至新的预冷的离心管中;悬浮培养或裂解前刮下的贴壁细胞皆Lysis Buffer一同转移至新的预冷的离心管中;
6、置于4℃摇床平台上,温和振荡15min;
7、14,000rpm,4℃离心15min,取上清为全蛋白提取物,蛋白定量(Bradford法、BCA法);
8、分装保存于-70℃,避免反复冻融。
注意事项:
1、所有接触样品的用具及试剂均需预冷。
2、提取蛋白后,如有必要,可透析除去表面活性剂。
3、本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
保存条件:
-20℃保存,1年有效。
新商城商品分类:实验室试剂 蛋白样品制备 蛋白提取试剂
关键词:
BB-3106-50T_EX1430-50T_KGB5301-50
关联产品:
BL1054A|BL521A|BL1434A|BL1320A|BL509A
说明书:
见附件
货号 | BL1590A |
规格 | 50T |
品牌 | Biosharp |
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