柱式动物总蛋白提取试剂盒（细胞样品）
商品详情：
产品简介：
本试剂盒可从动物悬浮细胞或贴壁细胞中提取总蛋白，用变性裂解缓冲液配合离心柱裂解细胞，无需超声处理打断DNA，提取过程简便高效，大约10分钟即可完成蛋白提取，可以提取到细胞内的绝大多数蛋白质（包括膜，细胞器，核，核基质和胞质蛋白）。获得的总蛋白可用于Western Blot检测、免疫沉淀（IP）等后续研究。由于裂解缓冲液中含有SDS等强变性剂，不建议用于免疫共沉淀（Co-IP）、EMSA以及酶活性分析等与蛋白活性相关的实验。
产品组分：
产品编号 | 产品名称 | 规格 |
BL1619A-1 | 变性裂解缓冲液 | 25ml |
BL1619A-2 | 离心柱套装（含离心柱和2ml连盖收集管） | 50套 |
使用方法：
一、准备即用型裂解缓冲液
取适当体积的预冷裂解缓冲液，在使用前数分钟内加入1/100体积的蛋白酶抑制剂（100×）（货号：BL612A），如果进行蛋白磷酸化研究，需要加入1/100体积的磷酸酶抑制剂（100×）（货号：BL615A），随后立即放于冰上待用。
二、贴壁细胞蛋白提取
1、将预冷的1×PBS直接加入培养板，培养皿或培养瓶中清洗贴壁细胞，吸去上清。
2、按照下表中将相应体积的变性裂解缓冲液均匀的加入整个器皿表面，用移液器吹打混匀，冰浴5分钟。
细胞类型 | 培养器皿 | 细胞数量 | 细胞沉淀体积（PCV）（μl） | 裂解缓冲液（μl） |
贴壁细胞 | 24孔板 | ~5×105 | ~5 | 50 |
6孔板 | ~2.5×106 | ~25 | 200 | |
25cm2培养瓶 | ~2×106 | ~20 | 200 | |
75cm2培养瓶 | ~8×106 | ~80 | 500 | |
35mm培养皿 | ~2×106 | ~20 | 200 | |
60mm培养皿 | ~5×106 | ~50 | 500 | |
100 mm培养皿 | ~1.5×107 | 调整细胞数目到2-5×106 | 200 |
注意：2×106 HeLa细胞，其细胞沉淀体积（PCV）大约为20μl。
3、将裂解的细胞转移到预冷的离心柱中，4℃ 16000g离心1min。
注意：裂解中细胞会释放出变性的核酸，呈团状粘稠透明样，如移液器不易吸取，可以将吸头剪尖，保证将全部裂解物加到离心柱中。
4、弃去离心柱，将收集管中蛋白溶液转移至干净的1.5ml离心管中，即可用于蛋白浓度测定和后续实验。
注意：如果收集管中有少许沉淀，只需收集上清即可。
三、悬浮细胞蛋白提取
1、400g 4℃离心5min收集细胞；用1ml 1×PBS重悬细胞，400g 4℃离心5min收集细胞；重复漂洗细胞一次；留下细胞沉淀备用。
2、按照下表加入相应体积的变性裂解缓冲液，用移液器重悬，冰浴处理5分钟。
细胞类型 | 细胞数量 | 细胞沉淀体积（PCV）（μl） | 裂解缓冲液（μl） |
悬浮细胞 | 1×106 | 10 | 100 |
2×106 | 20 | 200 | |
5-10×106 | ＞50 | 500 |
3、将裂解的细胞转移到预冷的离心柱中，4℃16000g离心1min。
注意：裂解中细胞会释放出变性的核酸，呈团状粘稠透明样，如移液器不易吸取，可以将吸头剪尖，保证将全部裂解物加到离心柱中。
| 货号 | BL1619A |
| 品牌 | Biosharp |
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