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PEI-293贴壁细胞转染试剂

PEI-293贴壁细胞转染试剂

¥300.00

货号:BL2357A

规格:1ml

品牌:Biosharp

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商品详情:

产品简介:

PEI-293贴壁细胞转染试剂是一种化合物转染试剂,不含动物源性成分,用于贴壁生长的293系列细胞(如HEK293、HEK293T、HEK293A、293FT等)的转染;为贴壁细胞提供高效且可重复的基因递送方案。在293细胞表达系统中,PEI-293贴壁细胞转染试剂在大范围内提供均一的高基因表达(96孔板至100L生物反应器)。特别适用于自动预制或手动高通量筛选转化方案,可用于抗体表达,各种病毒如AAV,慢病毒,腺病毒的包装,及重组蛋白。

本产品经经0.22µm滤膜过滤除菌。

 

使用方法(以6孔板为例)

一、接种细胞

为提高转染效率,建议转染前24小时接种细胞到6孔细胞板中,每孔5~10×105细胞,3ml完全培养基,转染时细胞密度在70%~80%为宜。

二、准备DNA-PEI复合物

1、对于每孔细胞,使用100μl无血清稀释液(如DMEM等)稀释2μg目的DNA,充分混匀成DNA稀释液。

注意:无血清稀释液建议采用Opti-MEM、DMEM或ddH2O,使用Opti-MEM更佳。

2、立刻向100μl的DNA稀释液中加入6μl的PEI-293贴壁细胞转染试剂,轻轻混匀。DNA:PEI(质量体积比,µg:µl)比例可以按需调整。

3、在室温下孵育10~15min,形成DNA-阳离子核酸转染试剂复合物。

三、转染细胞

1、在形成复合物过程中,移除细胞生长培养基,每孔中加入2ml新鲜预热的完全培养基。

2、将全部DNA-PEI复合物加入到细胞中,摇动培养板,轻轻混匀。

3、37℃,5% CO2培养箱培养,转染后最快24h即可检测到转染基因的表达(转染后24h进行一次换液,后续根据细胞类型和细胞密度,2-3天换液)。请根据实验确定适合的检测时间。

四、稳转筛选(可选)

转染24h后,将细胞传代至新鲜的生长培养基中(将细胞稀释10倍以上),37℃,5% CO2培养箱孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约1~2周可筛选到耐药性克隆,在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。

表1:用量一览表(以DNA:PEI比例1:3为例,仅供参考,建议优化)

培养器皿

表面积

(cm2)

培养基用量

(ml)

DNA用量(μg)/DMEM

(μl)

转染试剂用量(μl)/DMEM

(μl)

96孔板

0.4

0.2

0.1/25

0.3/25

24孔板

2

1

0.5/50

1.5/50

12孔板

4

2

1/50

3/50

6孔板

9

3

2/100

6/100

35mm培养皿

9

3

2/100

6/100

60mm培养皿

21

6

4/200

12/200

100mm培养皿

55

15

12/400

36/400

25cm2培养瓶

25

7

6/200

7.5/200

75cm2培养瓶

75

20

18/400

54/400

175cm2培养瓶

175

50

40/1000

120/1000

 

注意事项

  • 解冻后于2~8℃保存,可保存6个月,避免反复冻融。
  • 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
  • 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

保存条件:

-20℃保存,有效期24个月。

货号 BL2357A
规格 1ml
品牌 Biosharp
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