商品详情:
产品简介:
PEI-293贴壁细胞转染试剂是一种化合物转染试剂,不含动物源性成分,用于贴壁生长的293系列细胞(如HEK293、HEK293T、HEK293A、293FT等)的转染;为贴壁细胞提供高效且可重复的基因递送方案。在293细胞表达系统中,PEI-293贴壁细胞转染试剂在大范围内提供均一的高基因表达(96孔板至100L生物反应器)。特别适用于自动预制或手动高通量筛选转化方案,可用于抗体表达,各种病毒如AAV,慢病毒,腺病毒的包装,及重组蛋白。
本产品经经0.22µm滤膜过滤除菌。
使用方法(以6孔板为例):
一、接种细胞
为提高转染效率,建议转染前24小时接种细胞到6孔细胞板中,每孔5~10×105细胞,3ml完全培养基,转染时细胞密度在70%~80%为宜。
二、准备DNA-PEI复合物
1、对于每孔细胞,使用100μl无血清稀释液(如DMEM等)稀释2μg目的DNA,充分混匀成DNA稀释液。
注意:无血清稀释液建议采用Opti-MEM、DMEM或ddH2O,使用Opti-MEM更佳。
2、立刻向100μl的DNA稀释液中加入6μl的PEI-293贴壁细胞转染试剂,轻轻混匀。DNA:PEI(质量体积比,µg:µl)比例可以按需调整。
3、在室温下孵育10~15min,形成DNA-阳离子核酸转染试剂复合物。
三、转染细胞
1、在形成复合物过程中,移除细胞生长培养基,每孔中加入2ml新鲜预热的完全培养基。
2、将全部DNA-PEI复合物加入到细胞中,摇动培养板,轻轻混匀。
3、37℃,5% CO2培养箱培养,转染后最快24h即可检测到转染基因的表达(转染后24h进行一次换液,后续根据细胞类型和细胞密度,2-3天换液)。请根据实验确定适合的检测时间。
四、稳转筛选(可选)
转染24h后,将细胞传代至新鲜的生长培养基中(将细胞稀释10倍以上),37℃,5% CO2培养箱孵育过夜。第二天加入与转染抗性基因相匹配的筛选药物。约1~2周可筛选到耐药性克隆,在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。
表1:用量一览表(以DNA:PEI比例1:3为例,仅供参考,建议优化)
培养器皿 | 表面积 (cm2) | 培养基用量 (ml) | DNA用量(μg)/DMEM (μl) | 转染试剂用量(μl)/DMEM (μl) |
96孔板 | 0.4 | 0.2 | 0.1/25 | 0.3/25 |
24孔板 | 2 | 1 | 0.5/50 | 1.5/50 |
12孔板 | 4 | 2 | 1/50 | 3/50 |
6孔板 | 9 | 3 | 2/100 | 6/100 |
35mm培养皿 | 9 | 3 | 2/100 | 6/100 |
60mm培养皿 | 21 | 6 | 4/200 | 12/200 |
100mm培养皿 | 55 | 15 | 12/400 | 36/400 |
25cm2培养瓶 | 25 | 7 | 6/200 | 7.5/200 |
75cm2培养瓶 | 75 | 20 | 18/400 | 54/400 |
175cm2培养瓶 | 175 | 50 | 40/1000 | 120/1000 |
注意事项:
保存条件:
-20℃保存,有效期24个月。
货号 | BL2357A |
规格 | 1ml |
品牌 | Biosharp |
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