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产品简介：

siRNA/miRNA体内转染试剂是一种新型高效阳离子聚合物，可与RNA（包括siRNA、miRNA、重组RNA）相互作用形成纳米复合物，从而用于RNA的体内递送。具有递送效率高，安全性好等特点。

siRNA/miRNA体内转染试剂通过内吞作用进入细胞后，表达“质子海绵效应”的特性，缓冲内体pH值，保护RNA不被降解，连续的质子内流也可引起核内体渗透肿胀和破裂，为RNA逃逸到细胞质提供了机制。

产品组分：

使用方法：

一、试剂准备

1、为了形成大小均一且形态稳定的siRNA/miRNA体内转染试剂/RNA纳米复合物，推荐使用5%无菌无酶等渗葡萄糖溶液（提供10%无菌无酶葡萄糖溶液，体内注射时终浓度稀释至5%）；如果稀释RNA的溶液含盐量高可能导致与siRNA/miRNA体内转染试剂形成复合物时产生沉淀；RNA使用PAGE或HPLC进行纯化。

2、根据动物模型、给药途径、作用靶器官确定RNA使用量，最终注射液RNA浓度不超过0.5μg/μl以免产生沉淀。RNA与siRNA/miRNA体内转染试剂的推荐使用比例为质量体积比1:1(w/v，1μg RNA: 1μl siRNA/miRNA体内转染试剂)。表1是在小鼠中RNA转染的推荐配比剂量。

表1 小鼠中RNA转染的推荐配比剂量

二、转染

1、用10%葡萄糖溶液稀释RNA储备液（通常RNA储备液用无菌DEPC水配制），混匀。稀释后的RNA溶液体积为最终所需注射体积的1/2，葡萄糖溶液终浓度为5%；

2、用10%葡萄糖溶液稀释siRNA/miRNA体内转染试剂。所需siRNA/miRNA体内转染试剂体积按照转染试剂与RNA体积质量比1:1计算。转染试剂稀释后体积为最终注射体积的1/2，葡萄糖溶液终浓度为5%，混匀；

3、将稀释好的siRNA/miRNA体内转染试剂加入稀释好的RNA中，轻轻混匀；

4、室温孵育15分钟，此时所形成的复合物可在室温下稳定存放2小时；

5、在适当的时间（如注射后6-96小时）监测基因表达，具体时间取决于注射方式和目标器官；

6、以小鼠静脉注射途径给药为例说明复合物配制方式。如实验注射剂量为25μg RNA/只小鼠，RNA储备液浓度为1μg/μl；注射体积为100μl/只小鼠；RNA与siRNA/miRNA体内转染试剂的推荐使用比例为质量体积比1:1 (w/v，1μg RNA:1μl siRNA/miRNA体内转染试剂)。因此，单只小鼠需配制如下溶液：

7、RNA工作液，用10%葡萄糖溶液稀释RNA储备液；吸取25μl RNA储备液，加入25μl的10%葡糖糖溶液，混匀；

8、siRNA/miRNA体内转染试剂工作液，用10%葡萄糖溶液稀释siRNA/miRNA体内转染试剂；吸取25μl siRNA/miRNA体内转染试剂，加入25μl的10%葡糖糖溶液，混匀。RNA及siRNA/miRNA体内转染试剂工作液配制好后，将siRNA/miRNA体内转染试剂工作液加入RNA工作液中，轻轻混匀；室温孵育15分钟后，通过尾静脉进行注射。其余给药方式的配制过程与本例相同（表2）

表2 体内RNA转染的配比剂量举例

注意：RNA储备液浓度为1μg/μl。

注意事项：

• 使用高纯度的RNA是转染成功的关键因素，在转染前确定RNA的含量和纯度（OD260/280＞8），实验过程中使用DEPC处理过的耗材和试剂，避免RNase污染；另外RNA制备时盐含量高会导致复合物形成时产生沉淀，因此应将RNA重悬于5%葡萄糖溶液（由DEPC水配制）或DEPC水中。
• 体内转染所用RNA以及稀释液均为无菌制品，且操作步骤全程无菌。
• 体内转染时按需现配现用。
• 为了达到更好的转染效果，可根据实验需要优化RNA与转染试剂的配比，推荐优化比例范围为1:1~1:4 (w/v, RNA: siRNA/miRNA体内转染试剂)；
• 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

4℃保存，有效期12个月。