商品详情：

产品简介：

在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V是一种分子量为35~36kD的Ca²⁺依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素（EGFP、FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。与FITC的绿色荧光信号相比，EGFP的绿色荧光信号具有信号强，不易淬灭，稳定性高等优点，故本试剂盒采用EGFP作为荧光标记探针。

碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用，就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

本试剂盒可应用于培养细胞凋亡检测，不推荐用于检测组织样本。

产品组分：

使用方法:

• 细胞收集
• 悬浮细胞：800g离心力，离心5min收集。
• 贴壁细胞：贴壁细胞用不含EDTA的胰酶消化收集。

注意：胰酶消化时间不易过长，否则容易引起假阳性。

• 用PBS洗涤细胞两次（800g离心力，离心5min）收集1~5×10⁵细胞；
• 加入500μl的Binding Buffer轻轻吹匀成单细胞悬液；
• 加入5μlAnnexin V-EGFP混匀后，加入5μlPropidium Iodide，混匀；
• 室温避光反应10～20min；
• 请在1h内，进行流式细胞仪的观察和检测。
• 流式细胞仪分析
• 用流式细胞仪检测，Annexin V-EGFP（Ex=488,nm，Em=530nm）的绿色荧光通过FITC通道（FL1）检测；PI红色荧光（Ex=488nm，Em≥630nm）通过PI通道（FL2或FL3）检测，建议使用FL3。
• 荧光补偿调节：使用经凋亡诱导处理的正常细胞，作为对照进行荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。

注意事项：

1、微量试剂需离心数秒，将试剂收集至管底后再开盖取用。

2、Propidium Iodide（PI）有毒，操作时要带手套，使用时避免与皮肤，眼睛和黏膜接触。

3、Annexin V-EGFP，Propidium Iodide（PI）避光保存及使用。

4、本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不应低于1×10⁵，不推荐用于检测组织样本。

5、推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，需用不含EDTA的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮刀会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA的PBS中，防止进一步的损伤。

6、细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。

7、因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。

8、本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

9、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

保存条件：

4℃避光保存，一年有效