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BL1889A 通用型病毒浓缩液(3x)
BL1889A
Biosharp/白鲨
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商品详情:

 

产品简介:

通用型病毒浓缩液(Universal Virus Concentration Reagent, 3x)是一种简单、快速、高效的可用于多种常见重组病毒浓缩的产品。传统的病毒纯化方式是超速离心,这种纯化方式耗时,对设备要求高,且仅能处理有限的病毒液体。该产品可直接加入到含病毒的上清液中,使病毒沉淀,通过简单的离心与重悬步骤,即可有效提高病毒滴度。病毒回收率最高可达约90%,浓缩后病毒浓度可提高10-100倍。

本产品可用于实验室包装的慢病毒(Lentivirus)、逆转录病毒(Retrovirus)、腺相关病毒(Adeno-associated virus, AAV)、腺病毒(Adenovirus)和杆状病毒(Baculovirus)等病毒颗粒的浓缩。

 

使用方法(仅供参考):

  • 包装病毒完成后,收集含病毒的细胞上清液。4ºC,3500×g离心10min以充分沉淀细胞碎片,小心吸取上清液用于后续的浓缩。也可取含病毒的上清液,使用45μm针头滤器过滤以去除细胞碎片。

注:过滤时,须使用滤膜材质为聚醚砜(PES)的针头滤器,其它材质如硝酸纤维素(NC)膜可能对病毒有吸附。

  • 取出4ºC存放的病毒浓缩液,按照1份病毒浓缩液(3x)和2份病毒上清液的比例混合。上下颠倒充分混匀后,在4ºC孵育6-8小时。4ºC孵育充分后通常溶液会变浑浊。更长的孵育时间(如4ºC过夜),有助于提高病毒回收率,但孵育时间不宜超过24h。

注:病毒浓缩液(3x)非常粘稠,需缓慢吸取加入,并且一定要确保病毒浓缩液(3x)和病毒上清液两者充分混匀,才能确保病毒回收率。病毒浓缩过程中须保持4ºC,如果样品体积大,如超过100mL,建议更长的孵育时间。

  • 4ºC,7000×g离心5-1h。此时离心管底通常可见白色沉淀(有时沉淀不可见),小心吸除上清,切勿触及沉淀,不要剧烈晃动离心管。
  • 4ºC,7000×g离心1min,小心吸净少量的残留液体,切勿触及沉淀。
  • 加入原病毒上清液体积的1-10%的病毒重悬液,静置10min,然后使用移液器小心吹打20-30次,重悬病毒沉淀。吹打时避免产生气泡,剧烈吹打可能导致病毒失活。

注:如果看不到明显的白色沉淀,就在沉淀可能形成的区域用移液器小心吹打。白色沉淀的多少并不代表病毒量的多少。白色沉淀中除病毒颗粒外,还有血清蛋白和少量的细胞碎片和基因组DNA等。病毒重悬液:客户可根据具体实验需求自行准备。

  • 4ºC,12,000×g离心3-5min,吸取上清即为浓缩的病毒。可以根据后续的实验需要,适当分装后-80ºC冻存备用。

 

注意事项

  • 本为避免病毒失活,浓缩前的病毒上清液或浓缩后的病毒都应尽量避免反复冻融。
  • 细胞培养液中的血清对于病毒的沉淀和浓缩有一定的帮助。如果病毒包装用的细胞培养液是无血清或低血清培养液,或者需要从蛋白含量很低的溶液中浓缩病毒,建议在病毒浓缩时添加无菌的BSA至终浓度为3%,会显著提高浓缩效果。
  • 涉及到病毒的相关操作务必要在生物安全实验室内进行,接触过病毒液体的耗材要做好相关的生物防护处理,防止污染。
  • 本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。
  • 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

保存条件:

4℃保存,一年有效。

规格

50ml

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